El microscopio resultó en un invento de gran impacto. Permitió al ser humano acceder a un mundo nuevo y desconocido. Pues bien, el microscopio de campo oscuro es una variante existente dentro de los microscopios ópticos.
A este se le adapta un condensador especial, que va a permitir el paso de la luz a la muestra en forma de cono hueco. Esta particularidad se da, ya que se bloquean los rayos centrales que llegan a dicho condensador, formando así este cono.
Esta técnica va a permitir recoger sólo la luz que emite dicha muestra, apareciendo un fondo oscuro, y los objetos a analizar se ven con luz brillante. Este instrumento es usado frecuentemente para la observación de muestras a las cuales no se les aplica ninguna tintura.
Fue diseñado en el año de 1903 por Richard Zsigmondy, quien se desempeñó como un importante físico austríaco. Sus partes son las mismas de un microscopio óptico normal, con la única diferencia de la adición del condensador.
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La resolución en el microscopio de campo oscuro
La desventaja de utilizar el microscopio de campo oscuro es que se presentan imágenes de baja resolución, al no tener iluminación directa sobre la muestra. Esto incide en el poder de resolución, el cual no se basa en la capacidad de amplificar una imagen, sino en la calidad de la misma.
En esta técnica, la apertura numérica del objetivo no debe ser superior a 1, pues de ella depende justamente el poder de resolución. La iluminación, que igualmente incide en este tipo de microscopios, puede ser lograda de dos maneras, las cuales se clasifican según el tipo de condensador usado:
- Cardioide. Su nombre se deriva de la forma de cardioide que presenta la curvatura.
- Paraboloide. Son aquellos que en la superficie central llevan una curvatura en forma de parábola
Aunque ambos son usados para la misma finalidad, el cardioide es más usado en el estudio de espiroquetas Gram negativas.
Los condensadores de tipo cardioide, aún presentan una variante adicional que es muy poco común, los cuales son llamados tóricos o toroides. Son llamados así porque a los condensadores cardioide, se le añade una lente de tipo tórica.
Este sistema concentra por completo la luz y la envía al cardioide, logrando que la muestra sea iluminada en su totalidad. Es considerado el mejor sistema de su tipo, cuando se necesitan realizar observaciones superiores a los 40X.
¿Cuál es el uso común de este tipo de microscopio?
Este instrumento es usado principalmente para analizar los bordes, contornos y márgenes de la muestra vista. El microscopio de campo oscuro no es muy útil para obtener información e identificación de la parte interna de las células o partículas.
Principalmente, la muestra se representa por células vivas sin ningún tipo de tinción, aunque igualmente se pueden observar células teñidas. Tiene un uso muy útil en el área de la hematología, examinando la sangre fresca.
¿Cuáles son las ventajas de usar el microscopio de campo oscuro?
Entre las principales ventajas del microscopio de campo oscuro podemos mencionar:
- Se puede usar para observar muestras sin tintura o coloración.
- Permite analizar elementos transparentes, que de otro modo sería difícil de ver.
- Es ideal para observar el movimiento browniano de partículas.
- Es la técnica más recomendable para el estudio de organismos como las espiroquetas.
- Permite hacer el estudio con la célula viva, sin necesidad de fijarla (matarla).
Desventajas de la técnica de campo oscuro
También podemos hacer mención de algunas desventajas de este tipo de microscopio. Veamos algunas a continuación:
- Dificultades en la preparación de la muestra a estudiar.
- Alto costo en los accesorios que son necesarios para el funcionamiento del equipo.
- No es posible ver células específicas, solo bordes o contornos de las mismas.
- Baja resolución en las imágenes.
Procedimiento para el análisis de muestras
Las muestras a revisar en el microscopio de campo oscuro deben ser manejadas con extrema precaución, pues son muy susceptibles de ser contaminadas. Elementos como huellas dactilares o polvo van a generar un efecto negativo en la calidad de la imagen analizada. Esto es debido a las características de los planos de foco de la luz, tanto superior e inferior.
Método de observación
Para esta técnica existen varios métodos de observación, que se diferencian básicamente en la difracción de la luz.
- Observación por reflexión. También llamada observación por incidente, constituye la técnica más usada, y permite ver la muestra por medio de una reflexión oblicua de la luz.
- Observación por transmisión. Igualmente, denominada fondo negro central, se realiza usando un objetivo que posea pantalla interna.
- Observación birrefringente. Conocida también como polarización. Esta técnica emplea nicoles cruzados, o lo que es lo mismo; luz de polaridad plana en conjunto con otra luz polarizada, que se denomina analizador. Esta luces se encuentran perpendiculares y se pueden interponer, justo en ese momento es considerado nicoles cruzados.
- Observación de fondo negro anular. Esta técnica conocida como transmisión se da con iluminación anular, y es la que realmente es conocida como campo oscuro. Presenta la limitante, que no se usa en objetivos de gran aumento, pues no es recomendable por la apertura del condensador.
- Observación de fondo negro ultramicroscópico. También se le llama observación con un haz perpendicular, pues se proyecta de esta manera la luz hacia donde se observa; permitiendo conocer la orientación de las partículas en la muestra analizada.
Microscopio de campo oscuro, una opción para lo que no se ve
Todos sabemos que los microscopios nos han permitido ver esos pequeños organismos, que a simple vista, es imposible observar para el ojo humano. Sin embargo, este microscopio de campo oscuro nos brinda la oportunidad de ver, aquellos que son invisibles al resto de los microscopios.
El uso del condensador especial, para permitir el haz de luz preciso, deja analizar las muestras de una manera diferente; fundamentalmente vivas, manteniéndolas intactas y, además, sin el uso de tinturas. A pesar de las limitantes en la resolución, es una muy buena opción que se utiliza muy frecuentemente en la hematología.
Referencia:
http://microscopiooscuro.blogspot.com/2017/10/introduccion-enel-presente-blog-se.html
www.revistacienciasunam.com/es/1349-el-microscopio-de-campo-oscuro.html
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